Коалиция против СПИДа

Культивирование ВИЧ in vitro. Первые изоляты ВИЧ были получены влаборатории Р.Галло в 1983 году. Для выделения ВИЧ использовали первичную культуру клеток (мононуклеарные клетки крови) и перевиваемые линии (U-937, Molt-4, СЕМ). В качестве материала обычно используют лимфоциты периферической крови, ликвор, амниотическую жидкость, биопсийный материал мозга и солидных лимфоидных тканей и пр. Основные этапы культивирования ВИЧ включают:
•выделение и культивирование мононуклеаров периферической крови in
vitro с митогеном ФГА в течение 3 суток;
•выделение мононуклеаров ВИЧ-инфицированного пациента;
•сокультивирование простимулированных клеток донора с клетками пациента в присутствии фактора роста Т-лимфоцитов — интерлейкина-2.
•культивирование проводится в течение 3-4 недель, с постоянным контролем и добавлением простимулированных клеток донора.
Для индикации вируса регулярно просматривают культуру клеток под световым и электронным микроскопом на наличие ЦПД (синцитиев) и вируса. Кроме того, используют определение обратной транскриптазы в надосадочной жидкости, исследуют экспрессию антигена путем непрямой иммунофлюоресценции, определяют антиген ВИЧ в ИФА, выявляют нуклеотидные последовательности ВИЧ молекулярно-генетическими методами.